产品货号:
BTN12-3480
中文名称:
马铃薯晚疫病菌可视化LAMP试剂盒
英文名称:
Phytophthora infestans Colorimetric LAMP Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是根据可视化LMAP技术开发的简单快捷的专门检测马铃薯晚疫病菌的试剂盒。
马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)属鞭毛菌亚门疫霉属真菌,是一种相当严格的寄生菌,可引起马铃薯晚疫病,主要危害马铃薯茎、叶和块茎,也能够侵染花蕾、浆果。马铃薯晚疫病是马铃薯的主要病害之一,该病在中国中部和北部大部分地区发生普遍,其损失程度因各地气候条件不同而异。在适宜病害流行的条件下,受害植株提前枯死,可造成20~40%的产量损失。因此快速检测马铃薯晚疫病菌具有重要意义。
- 即开即用,用户只需要提供DNA样品。
- 恒温扩增,可以不需要荧光PCR等贵重仪器。
- 含可见光染料,可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果。
- 检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
- 特异性高,根据马铃薯晚疫病菌保守序列设计6条特异引物,不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
- 一般30分钟内出结果,比PCR快。
- 上样量大,对20μL的反应体系,最大样品加样量高达到14μL。
- 提供无传染性的阳性对照,便于分析实验结果。
- 本制品只能用于定性分析,不推荐用于定量分析。
- 本制品足够50次20μL体系的可视化LAMP扩增。
- 本制品只可用于科研。
组分 | 规格 |
4×Visual LAMP MasterMix | 200μL |
Bst2.0 DNA聚合酶 | 50μL |
20×马铃薯晚疫病菌LAMP引物混合干粉 | 50次 |
马铃薯晚疫病菌LAMP阳性对照(1×104拷贝/μL) | 250μL |
超纯水 | 1mL |
保存:-20℃,有效期1年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心,然后在离心管中加入200μL超纯水充分混匀后再使用,未用完的需要-20℃保存。
一、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品DNA,本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容,包括本公司的免提取的核酸释放剂。
- 如果有N个样品,则需要做N+2个样品制备,包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照(1×104拷贝/μL)加一定量的水作为样品制备PC,加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。
二、LAMP反应
- 反应设置:第一次使用时请把50μL Bst2.0 DNA聚合酶加入到4×Visual LAMP MasterMix中,轻柔颠倒20次充分混匀,然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品,则最好设置N+4个LAMP扩增,增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分:
成分 N+2个
样品管LAMP
阴性对照LAMP
阳性对照4×Visual LAMP MasterMix(已加酶) 各5μL 5μL 5μL 20×马铃薯晚疫病菌LAMP引物混合液 各1μL 1μL 1μL N+2个样品DNA 各14μL - - 超纯水 - 14μL - 马铃薯晚疫病菌LAMP阳性对照(1×104拷贝/μL) - - 14μL - 如果使用金属浴或水浴保温,没有热盖,则每个反应管中加入50μL自备的PCR级石蜡油,否则保温期间反应体系的水分会蒸发到管盖下方凝集,反应体积变化,会严重影响反应效率,增加假阳性率。最后置于65℃保温60分钟进行扩增。
- 如果使用常规PCR仪进行LAMP反应,设置程序时必须打开热盖,设置成65℃保温60分钟进行扩增。
三、结果分析
- 电泳分析:由于取样时非常容易产生气溶胶污染,污染实验环境并且非常难清除污染,所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用,也要在不同的房间,使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。LAMP阳性对照必须有正常LAMP条带(200bp左右的梯形扩增产物),LAMP阴性结果必须无条带,否则实验结果无效。如果LAMP阳性对照和阴性对照结果正常,再分析待测样品。典型的电泳结果见下表,奇数样为阴性结果,偶数样为阳性结果:
- 可将光(肉眼)分析:样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将呈蓝色,样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将呈淡蓝色或无色,否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常,则实验有效,可以分析样品的情况。样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明样品为阳性,如果接近阴性对照则说明待测样品为阴性。典型的可将光检测结果见左图(9为阴性,10为阳性)。
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